招财鱼诺卡氏菌病的组织病理学研究

2023-12-15 13:39| 发布者: 当代水产| 查看: | 评论: 0

    招财鱼（osphronemus goramy），又称长丝鲈、大飞船、古代战舰（古代战船）。原产于南美洲亚马逊河，属攀鲈科。成鱼体长20~69cm，椭圆形，头大，嘴大，体格强壮，腹鳍是两根细长的丝鳍，臀鳍宽大，胸鳍发达。背鳍前部较低，后部挺拔；臀鳍由后腹部一直延伸到尾柄；臀鳍、尾鳍金黄色。全身金黄色，眼睛金黄色，体表鳞片边缘透着淡淡的红色，有金属光泽。在光线照射下全身散发着金黄色光芒，金碧辉煌。在观赏鱼市场上一种比较受欢迎的大型热带鱼，市场前景广阔。该鱼原产于南美洲亚马逊河，体格强壮，抗逆性强，野生条件下极少生病。但最近几年，在养殖过程中出现一种被称为“红斑病”的疾病时有发生，给广大观赏鱼爱好者和养殖者、经营者造成巨大的经济损失。2009年9~12月我市某水族商店经销的招财鱼发生该病，累计死亡近百尾，损失5万余元。主要症状为体表出血，溃疡。严重者形成瘘管；肾脏、肝脏、脾脏、心脏、鳔、肌肉等器官表面形成白色或黄色小结节。经鉴定该病的病原为诺卡氏菌。
    诺卡氏菌病(nocardiosis)是由高等细菌诺卡氏菌(Nocardia)起鱼类的一种慢性全身肉肿传染病。水产动物中首例报道诺卡氏菌病的是虹彩脂鱼(Hyphessobrycon innesi) ，以后在虹鳟(Oncorhynchus mykiss) 、黄尾鰤(Seriola quinqueradiata)、红鲑(Oncorhynchus nerka)等水产动物中分离到诺卡氏菌。国内首例报道是大黄鱼(Larimichthys crocea)感染鱼诺卡氏菌(Nacardia seriolea)，淡水鱼中台湾陈石柱有报道乌鳢(Ophiocealu sargus)感染星状诺卡氏菌(Noearkia asteroids) 。国内尚未见招财鱼诺卡氏菌病病理学报道。本研究从病理学角度。对发病鱼的皮肤、肌肉、肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肠道等组织进行病理组织进行系统研究，旨在为招财鱼诺卡氏菌病的临床诊断、病理学研究及疾病的预防提供基础资料。

1  材料与方法
1.1  材料
    患病鱼于2010年4月取自河南信阳市某观赏鱼店，体长15 cm左右，体重150g左右。
1.2  方法
    显微病理材料制备   将发病鱼皮肤和肌肉溃烂处、鳃、肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肠道和卵巢等组织，用Bouin氏液固定24h，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。RM-2145型Leica轮转式切片机连续切片，厚度为3~5µm，H.E常规染色法和Ziehl～Neelsen抗酸杆菌染色法，OLYMPUS显微镜观察，MD20显微摄影。
活组织压片制备   取患病鱼病变组织的1~2个结节置于载玻片上，做压片，Ziehl～Neelsen抗酸杆菌染色。

2  结果
2.1  临床病理变化
    患病初期，病鱼反应迟钝，食欲下降，体表无明显症状；随着病情加重，体表出现损伤、溃烂，腹部膨胀；严重病例背部、腹部和尾部体表损伤并溃烂出血，更有甚者体表形成脓肿或瘘管(图1)，随后逐渐死亡。剖检观察到有无色或淡黄色腹水，内脏有明显的病变。病鱼肝脏、脾脏和肾脏等内脏器官肿胀，首先在肾脏表面出现白色结节，随后在肝脏、脾脏、鳔、头肾、鳃弓和鳃丝、心脏逐步出现白色小结节，随着病情加重，几乎所有的器官表面布满白色结节，直径0.1~0.5cm(图2)，肝脏表面结节主要分布在肝下缘，严重病例整个肾脏(头肾、中肾和后肾)和脾脏都布满白色结节；肝脏、肾脏、脾脏的切面也可看到白色的结节；其他器官未见明结节。
2.2  显微病理变化
    光学显微镜下观察到肾脏、肝脏、脾脏、头肾、肌肉、表皮、心脏、肠道、鳃和卵巢等器官内部有大量的慢性肉芽肿结节，还伴有器官的细胞病理变化。一般肾脏、肝脏、脾脏结节较多，其它器官结节较少。轻微病例脏器内部的结节较少，直径较小，严重病例脏器内部的结节较多，甚至融合在一起，直径较大，细胞的病变也较严重。
结节的结构和类型   各脏器的结节没有明显的差异，结节基本结构可分3层，典型的结节结构由中心向外，依次为：
2.2.1  干酪样坏死
    典型结节的中央为干酪样坏死，内含坏死的组织细胞和白细胞，这些坏死细胞呈无结构的颗粒性物质，其间有大量的诺卡氏菌呈长杆状或分枝状，单个或几个连在一起呈链状或树枝状存在。H．E染色细菌呈嗜碱性，丝状或分枝状；Ziehl～Neelsen抗酸杆菌染色呈紫红色，在细菌体内可看到多个深染的紫红色珠状结构。
2.2.2  类上皮细胞和多核巨细胞
    干酪样坏死灶周围可见大量胞体较大、边界不清的细胞。这些细胞的胞核呈圆形或卵圆形，染色质少，甚至可呈空泡状，核内可有1～2个核仁，胞浆丰富，染成浅红色。根据其形态与上皮细胞相似，故称类上皮细胞。多核巨细胞散在类上皮细胞之间。有些结节的类上皮细胞周围可见大量淋巴细胞浸润。
2.2.3  成纤维细胞和纤维细胞包膜
    结节的最外层由数层成纤维细胞和纤维细胞组成的包膜包围。
    结节结构在不同形成期，稍有差异，可分为几种类型。
    结节形成初期。没有明显的结节结构，直径较小。主要由坏死的组织细胞和白细胞组成，白细胞主要是吞噬细菌和被细菌感染变性坏死的细胞，几乎看不到细菌。
    结节形成中期。结节具有典型结节的基本结构，直径较大。中央的坏死组织范围较小，细菌集中在最中心，呈明显的分枝状，大量的细菌呈相互嵌合成团状，菌丝呈树枝状相互较量在一起，其间坏死的细胞较少，坏死的细胞在细菌团块的外围。其它结构与典型结节结构几乎相似。
    结节形成中后期。结节的个体较大，结构较完整。结节中央坏死组织范围较大，其中的细菌主要呈个杆状、多个细菌连在一起呈长链状，细菌开始向结节外围分布，其它结构与典型结构一致。
    结节形成晚期。多个结节相互融合，外围的纤维细胞包膜包绕由几个中心组合而成的中央坏死组织，中央坏死组织的成分与中期的类似，在包膜外有大量的淋巴细胞或炎性细胞。

器官的主要病理变化：
    肾脏  肾小球毛细血管扩张，充血；肾小管上皮细胞水肿，变性，胞质中有嗜伊红的透明滴状变，严重病例，上皮细胞脱落，坏死，坏死物填充肾小管，形成坏死灶；肾间质淋巴细胞和白细胞大量增生，严重的慢性增生特征。
    肝脏  肝脏中央静脉和肝窦淤血；肝细胞肿胀，脂肪变性，肝细胞内的脂肪空泡较小，起初多见于核的周围，以后变大，较密集散布于整个胞浆中，严重时可融合为一个大空泡，将细胞核挤向胞膜下，状似脂肪细胞。
    鳃   鳃小片毛细血管扩张，充血；鳃小片上皮细胞肿胀，增生；由于鳃小片基部和鳃小片上皮细胞增生，从而使鳃小片变粗，变短，起初增生部位的炎性细胞增多，随后病变严重部位，鳃小片和基部上皮细胞不断增生，使鳃小片粘连，而棒状化；病变严重部位，鳃小片与鳃丝的轴骨交界处细胞坏死，结节形成(图版-8)。鳃弓表面被覆上皮组织、鳃弓和鳃弓骨组织中也有结节形成；鳃丝基部大量炎性细胞增生。
    脾脏  脾脏白髓淋巴细胞明显增多，红髓血窦扩张、淤血；轻微病例结节较少，在结节最外层，有大量淋巴细胞；严重病例，结节较多，几乎分布在整个脾脏中，淋巴细胞相对轻微病例较少。
    心脏  心外膜毛细血管扩张，充血；轻微病例，心肌窦皮细胞肿胀，增生，心肌细胞肿胀；严重病例心肌细胞肿胀，断裂，溶解，坏死，最后形成结节；心脏结节较少。
    皮肤皮肤表皮细胞变性，坏死，脱落，有炎性细胞浸润；微血管扩张，淤血；皮下结缔组织增生，其间有大量结节。
    肌肉  肌纤维之间有结节形成，骨骼肌纤维水泡变性，肿胀，断裂，溶解，坏死；肌纤维之间血管增生，扩张，淤血，结缔组织增生。
    肠道  肠道的固有层的结缔组织中有少量结节形成；轻微病例，肠绒毛中淋巴细胞和炎性细胞增多，部分肠绒毛上皮细胞变性坏死；严重病例，肠绒毛上皮细胞坏死增多，同时，肠道固有层细胞坏死，形成结节。
    卵巢  在卵细胞之间的结缔组织之间有少量的结节，其它病变不明显。
2.3  活体压片细菌形态
    活体压片观察到菌体呈杆状或丝状分布在结节之间，有的单个存在，有的连结在一起。细菌形态与组织切片中一致。

3   讨论
    诺卡氏菌病是由诺卡氏菌引起的一种鱼类慢性全身肉芽肿传染病。主要症状为体表溃疡，严重者形成瘘管；肾脏、肝脏、脾脏、心脏、鳔、肌肉等器官表面形成白色或黄色小结节。诺卡氏菌是一种革兰氏阳性丝状杆菌，广泛分布在土壤、活性污泥、水、动植物和人的组织中，以腐生为主。一些菌株是人和动物的机会致病菌，在人、哺乳类动物、鸟类都有报道，其基本症状是内脏有白色或黄色结节，与水产动物相似，在广义上讲是一种人畜共患病，因此应对该病引起重视。
    患病招财鱼的临床症状和病理解剖特征为头部、腹部体表出血，严重病例溃疡，内脏器官出现明显的白色或黄色结节，与资料报道虹彩脂鱼、虹鳟、海鲈等水产养殖动物感染诺卡氏菌的症状基本相似。病理组织学观察在肝脏、肾脏、鳃、脾脏等器官有大量的慢性肉芽肿结节，H．E染色油镜观察到结节中央有大量的长杆状或丝状细菌；提示该菌为招财鱼红斑病的致病菌。对活体压片和石腊切片进行Ziehl．Neelsen抗酸杆菌染色，显示该菌为弱抗酸性菌，依据临床症状和组织学观察，其结果与资料报道诺卡氏菌病极为相似，初步诊断该病为诺卡氏菌病。
    从发病器官来看，此次招财鱼自然发病最早的器官是肾脏，随后在肝脏、脾脏、鳃、皮肤、肌肉、心脏、肠道也有结节，机体的所有器官几乎都受到损伤。整个过程持续时间较长，且病理组织学有慢性肉芽肿结节，提示该菌是一种慢性致病菌。甚至有些病例在卵巢也有结节形成，与资料报道一致，说明细菌可侵入卵巢，此致病菌有垂直传播的可能。
    从病理组织学结果看，发病最严重的器官是肾脏、脾脏、肝脏、鳃和皮肤。诺卡氏菌主要引起肾脏、肝脏、脾脏、鳃等器官的慢性肉芽肿，严重病例整个肾脏，包括头。肾、中肾和后肾都有慢性肉芽肿结节。慢性结节中心坏死可能是细胞介导免疫反应的结果，其形成的过程可能是诺卡氏菌进入器官，在机体与病菌在损伤与抗损伤的斗争过程中，机体的巨噬细胞和炎性细胞增多，但由于诺卡氏菌菌丝较长，菌体较大，因此不容易被吞噬细胞和炎性细胞消化溶解，引起器官实质细胞变性坏死，随坏死细胞的增多，形成坏死灶；同时由于诺卡氏菌生长繁殖缓慢，使疾病过程加长，这致使细菌与坏死组织周围逐渐形成结缔组织包膜，防止细菌扩散，作为对机体的保护，从而形成结节。随病情加重，结节中的细菌不断繁殖增生，向结节外扩散，在周边也形成结节，随后几个结节相互融合，发展到结节晚期。
    诺卡氏菌还引起器官的其他病理变化，因实质细胞变性坏死，大量结节形成，引起慢性代偿性增生，使呼吸器官、排泄器官、免疫器官衰竭而死。由于鳃小片基部和鳃小片上皮细胞不断肿胀，增生，使鳃小片粘连，棒状化；加上大量结节形成，造成排泄和呼吸障碍；肾小球毛细血管扩张，肾小管上皮细胞水肿、变性、脱落、坏死，坏死物填充。肾小管，形成坏死灶，造成排泄和分泌障碍；肝脏中大量结节和大面积肝细胞脂肪变性，最终使肝代谢受到阻碍，引起肝功能障碍，肾脏、肝脏和鳃的功能衰竭，是病鱼死亡的重要原因之一。肠绒毛上皮细胞坏死，固有层细胞坏死，形成结节，使消化和吸收受到影响，引起机体的营养不良，身体消瘦，最终致使机体代谢紊乱；心肌细胞肿胀，断裂，溶解，坏死，最后形成结节，心肌收缩力减弱，引起心脏功能衰竭，是加速病鱼死亡的又一因素。免疫器官脾脏、头。肾和。肾间质淋巴细胞和粒细胞大量增生，病变初期具有慢性增生特征，病变后期脾脏和。肾脏的大量结节形成，使免疫细胞减少，免疫功能降低，使机体抵抗力降低，为其他病原继发感染提供了便利。
    由于诺卡氏菌生长较慢，造成的病情不剧烈，在发病前期症状不明显，因此对该病的早期诊断和防治带来极大困难。但病情持续时间长，发病率和死亡率都较高，造成的经济损失巨大。水产动物养殖中，对致病诺卡氏菌的相关研究主要是病原的研究，对其传播途径、致病机理和防治研究较少。对于诺卡氏菌的传播途径，一般认为在自然情况下发病可能是由于集约化程度高，养殖密度过大，致使鱼体容易损伤和体质下降，给病原菌提供了致病机会。因此对该病的传播途径、早期诊断、快速检测、致病机理和预防治疗等方面作进一步研究具有重要意义。